自己培养工程菌需要遵循以下步骤：

实验仪器及菌种准备

准备所需的实验仪器，如三角瓶、无菌超净工作台、培养箱、酒精灯、枪头等。

准备含有目的基因质粒的大肠杆菌甘油菌（如含质粒PUC18）。

培养基的配制

配制LB液体培养基和LB固体培养基。液体培养基成分包括蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl 5g/L，pH值为7.0。固体培养基在此基础上加入16g/L的琼脂。

菌种的活化

将甘油菌接入附加有抗生素（如Kan 50 mg/L）的液体培养基中，在恒温培养箱中振荡培养37℃12-16小时。

菌种的划线培养

将培养过夜的菌液用接种环接种至固体培养基上，37℃培养12-16小时，待平板上长出单菌落后，挑取单菌落进行下一步扩大培养。

菌种的扩大培养

用牙签或枪头挑取单菌落接入液体培养基中，在恒温培养箱中振荡培养37℃12-16小时，以此方式重复进行，以获得足够数量的工程菌。

实验过程中的注意事项

所有培养基、器材需进行高压灭菌处理，如将培养基、枪头、三角瓶、培养皿等放入高压灭菌锅中121℃灭菌20分钟。

无菌超净工作台在使用前需打开紫外灯灭菌30分钟。

思考题

在培养基中加入抗生素的作用是什么？

培养基及器材的灭菌方法有哪些？

无菌超净工作台的灭菌步骤是什么？

如何进行甘油菌的活化？

菌种的划线培养技巧有哪些？

通过以上步骤，可以成功培养出工程菌，并在需要时进行重新活化培养。在实际操作中，可能还需要根据具体的工程菌种类和实验要求调整培养条件和步骤。