基因工程主要包括以下步骤:
目的基因的制备
获取符合要求的DNA片段,称为“目的基因”。
目的基因可以人工合成,也可以用限制性核酸内切酶从基因组中直接切割得到。
目的基因与克隆载体的重组
构建基因的表达载体,通常使用质粒、λ噬菌体和病毒等作为载体。
用同种限制酶切割含有目的基因的DNA和运载体DNA,再用DNA连接酶连接形成重组DNA分子。
将目的基因导入受体细胞
借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径,将含有目的基因的重组质粒导入受体细胞。
常见的导入方法包括CaCl2处理细菌以提高细胞壁的通透性。
目的基因的检测与鉴定
从导入的受体细胞中筛选出含有目的基因的克隆子。
通过核酸杂交、DNA顺序分析、宿主细胞选择、基因转移、工程细胞克隆及筛选等方法对目的基因进行表达及其控制。
这些步骤共同构成了基因工程的基本流程,旨在通过体外构建杂种DNA分子并将其导入活细胞,以改变生物原有的遗传特性,最终获得新品种或生产新产品。