基因工程的方法主要包括以下几种:
植物细胞工程技术
植物组织培养
植物体细胞杂交
动物细胞工程技术
动物细胞培养
动物细胞融合
单克隆抗体的制备
核移植和胚胎移植等
遗传工程技术
基因拼接技术(基因工程)
基因工程的具体步骤
获取目的基因:PCR扩增技术
构建基因表达载体
将目的基因导入受体细胞:基因枪法、农杆菌转化法、花粉管通道法(植物)、显微注射法(动物)
目的基因的检测:DNA分子杂交技术、抗原抗体杂交技术、直接观察形状法
基因工程中的关键工具
酶:限制性核酸内切酶、DNA连接酶
载体:质粒载体、噬菌体载体、Ti质粒、人工染色体
目的基因的获取方法
从供体细胞的DNA中直接分离基因(如鸟枪法)
人工合成基因(根据已知的蛋白质氨基酸序列推测基因序列)
基因表达载体的构建
将目的基因与运载体结合,形成重组DNA分子
目的基因的导入
利用细菌或病毒侵染细胞的途径将重组DNA分子引入受体细胞
目的基因的检测和表达
检测受体细胞中是否导入了目的基因
确认目的基因是否表达并产生预期的性状
这些方法共同构成了基因工程的技术体系,使得科学家能够按照预先设计的蓝图,在体外构建杂种DNA分子,并将其导入活细胞,从而改变生物原有的遗传特性,获得新品种或生产新产品。