石油醚是一种常用的有机溶剂,可以与丙酮或其他有机溶剂混合使用,用于分离叶绿体中的色素。以下是使用石油醚分离叶绿素的步骤:
提取叶绿素
将新鲜植物叶片(如菠菜)洗净并擦干。
去除叶柄和叶脉,将叶片剪碎。
将剪碎的叶片放入研钵中,加入适量的95%酒精和少量碳酸钙粉末,研磨成匀浆。
再加入更多的95%酒精,继续研磨至充分提取叶绿素。
将研磨好的匀浆通过滤纸过滤,收集滤液。
分离叶绿素
将滤液倒入分液漏斗中,加入适量的石油醚,轻轻摇动使色素转移到石油醚层。
静置数分钟,待分层清楚后,弃去下面的水层和丙酮层。
如果发生乳化现象,可以加入饱和NaCl溶液帮助分层。
再次加入蒸镏水,轻轻摇动,使色素完全转移到石油醚层。
取出带有色素的滤纸条,风干后可以看到分离出的各种色素条带,通常按β-胡萝卜素、无镁叶绿素、叶绿素a、叶绿素b和叶黄素的顺序排列。
显影和干燥
将带有色素的滤纸条放入层析缸中,使用石油醚(60~90℃)-丙酮醚(3:1:1)或其他合适的显影剂进行显影。
在色谱柱内壁周围贴一张滤纸,滤纸下部浸入显影剂中,盖上盖子平衡一段时间。
取出硅胶板,在通风柜中干燥,可以看到色谱板上有几个色素条带,分别代表不同的叶绿素成分。
通过以上步骤,可以使用石油醚有效地分离叶绿体中的不同色素成分。